Qué tener en cuenta al elegir el microscopio adecuado para el sistema de obtención de imágenes de células vivas

Para realizar experimentos de obtención de imágenes de células vivas con éxito, es fundamental utilizar el enfoque adecuado. Al elegir un microscopio adecuado para la obtención de imágenes de células vivas, se deben tener en cuenta los siguientes aspectos: viabilidad de la muestra, velocidad de adquisición de imágenes (resolución temporal) y resolución requerida en las tres dimensiones.

During live cell imaging, certain environmental conditions must be maintained to avoid detrimental physiological changes. In order to capture physiologically relevant cellular dynamics, live cell experiments require specific environmental conditions, including temperature, pH (via CO2), and humidity control. Furthermore, some experiments may even require hypoxic conditions. Modern incubation systems not only tightly control environmental conditions, they can also provide detailed data reports and alert users to temperature, gas, or humidity variations during the course of an imaging experiment. To minimize or avoid the effects of photodamage, getting the right balance between sensitive detection, accurate label separation (if using >1 etiqueta) y la dosis de luz más baja para la excitación es crucial.

En los experimentos con células vivas, la adquisición a alta velocidad suele ser fundamental, en particular para el estudio de procesos dinámicos rápidos, como la observación de vesículas. El uso de filtros ópticos genera limitaciones de velocidad debido a la necesidad de obtener imágenes secuenciales al cambiar los conjuntos de filtros para cada color, que se utilizan para estudiar la interacción de múltiples componentes. La obtención de imágenes secuencialmente requiere más tiempo que la obtención de imágenes simultáneas y, como resultado, se pueden perder movimientos rápidos de las muestras durante la adquisición, ya que cada color tiene un intervalo de tiempo más largo entre una imagen y la siguiente. Además, cuando la comparación directa entre dos o más colores es esencial, las señales pueden haberse movido incluso entre la adquisición individual de los fluoróforos, lo que complica la interpretación de los datos.

Existen múltiples tecnologías disponibles para adquirir imágenes en 3 dimensiones a lo largo del tiempo. La elección del sistema depende de su experimento y de si su prioridad es una mayor velocidad o una menor iluminación de la muestra durante la obtención de imágenes a la hora de adquirir la resolución 3D deseada. La elección del sistema más adecuado ha requerido tradicionalmente una elección entre un sistema de obtención de imágenes de células vivas basado en cámara o confocal; sin embargo, las soluciones modernas pueden proporcionar ambas modalidades de forma integrada.